X

在线客服

在线咨询

在线咨询

咨询热线021-5954 1913

请扫描二维码

进入微信公众号

间充质干细胞

Applied Cell™ 人间充质干细胞诱导成脂分化试剂盒

目录价:1688元

货号:AC-1001029
规格:100mL

保存条件:基础培养基2-8℃,添加剂-20--80℃保存;混合后2-8℃保存,2-3周内使用完毕

使用范围:间充质干细胞诱导分化成脂

保质期:1年

  • 产品简介
  • 产品手册
  • 质检报告
产品简介

     间充质干细胞成脂诱导分化试剂盒是埃泽思生物科技有限公司Applied Cell™自主研发的一款用于人间充质干细胞诱导分化成脂的试剂盒,可用于骨髓、脐带、脂肪等组织来源的间充质干细胞的诱导成脂分化。

     本产品仅限于科学研究,不能用于临床诊断、治疗,以及其他用途。

产品特性
诱导分化程序简单便捷。

诱导成脂细胞效率高。


操作方法

1. 相关材料

Xeno-Free人间充质干细胞培养基(Applied Cell™:Cat.AC-1001003)

•人间充质干细胞诱导成脂分化试剂盒(Applied Cell™:Cat。AC-1001029)

成脂检测染液(Applied Cell™:Cat。AC-1001022)

• 细胞固定液(Applied Cell™: Cat.AC-1001026)

Xeno-Free细胞消化液(Applied Cell™: Cat.AC-1001024/1001025)

• Phosphate-Buffered Saline (PBS) 


2.实验准备

     由于人间充质干细胞诱导成脂分化试剂盒中各组分的复杂性,此试剂盒分为诱导成脂分化培养基和脂肪维持培养基,客户在拿到试剂盒后,需要先配制人间充质干细胞脂肪维持培养基,再以脂肪维持培养基为基础,配制诱导成脂分化培养基,具体配制方法如下:
2。1人间充质干细胞脂肪维持培养基的配制
2.1.1 在2-8℃解冻间充质干细胞脂肪维持培养添加剂和双抗,轻晃摇匀;
2。1。2 随后将添加剂加入到间充质干细胞脂肪维持基础培养基中混匀,同时加入双抗即为间充质干细胞脂肪维持培养基。间充质干细胞脂肪维持培养基可在2-8℃稳定储存2-3周。
注意:间充质干细胞脂肪维持培养添加剂只能在2-8℃解冻,可按实际用量对添加剂进行分装,分装后立即使用或储存于-20℃至-80℃保存。
2.2人间充质干细胞诱导成脂分化培养基的配制
2.2.1 在2-8℃解冻间充质干细胞诱导成脂分化添加剂,轻晃摇匀;
2.2.2 取配制好的间充质干细胞脂肪维持培养基50mL,加入100µL解冻的间充质干细胞诱导成脂分化添加剂,轻摇混匀即为间充质干细胞诱导成脂分化培养基。间充质干细胞诱导成脂分化培养基可在2-8℃稳定储存2-3周。
注意:人间充质干细胞诱导成脂分化添加剂只能在2-8℃解冻,可按实际用量对添加剂进行分装,分装后立即使用或储存于-20℃至-80℃保存。


3。 实验操作
3.1诱导成脂(以6孔板为例)
3.1.1 将传代或复苏冻存的间充质干细胞接种到6孔板上,密度为2×104 -3×104 cells/cm2或2×104 -3×104 cells/孔,置于37℃,5% CO2培养箱中培养;
3。1。2 当间充质干细胞融合度达到80-90%时,开始诱导脂肪前体细胞分化。吸掉 xeno-free间充质干细胞培养基,每孔加1ml预热PBS清洗一次,吸掉PBS,加入2 ml间充质干细胞诱导成脂分化培养基,以此记为第0天;
注意:间充质干细胞诱导成脂分化培养基使用前需预热至37℃。
3.1.3 每2-3天更换间充质干细胞诱导成脂分化培养基,直到获得成熟的脂肪细胞(hASCs约需要12-14天)
3。1。4第7天开始更换,加入间充质干细胞脂肪维持培养基,每2-3天更换一次。
注意:



1.培养基每2-3天换液。由于随着脂肪细胞的成熟,pH的降低会观察到培养基变黄。pH从7降到6.5,细胞增殖会变慢。pH在6.5到6时,细胞活力会降低。当培养基从红色 (pH 7)变成黄色(pH≤6)时,需要马上换液。
2.换液时一定不能使培养基变干,培养基变干会降低细胞层对塑料培养表面的粘附。
3.细胞分化效果和供体有关。供体的年龄是一个因素。有研究发现与年长者相比,年轻供体来源的细胞的分化能力更强。



3.2 成脂检测染液染色
3.2.1 诱导分化12-14天后,会出现明显的蜂窝状脂滴形态,用细胞固定液(Applied Cell: Cat.AC-1001026)固定细胞:吸掉间充质干细胞脂肪维持培养基,用PBS洗一下,将细胞沉浸在固定液中,时间大概10min至30min。
注意:染色前吸掉固定液(固定过的细胞可以放在4℃保存几个月,不过因为样品有脱水风险,建议固定后马上染色)。
3.2.2 吸掉细胞固定液,用PBS冲洗2次。每孔中加入1 mL成脂检测染液染(Applied Cell: Cat.AC-1001022),室温染色15min;
3.2.3 吸掉成脂检测染液,用PBS冲洗2-3次;
3.2.4 将培养板置于显微镜下观察成脂染色效果;
3.2.5 拍照。可以用苏木精或曙红染色细胞核增强效果。

注意:染色后显微镜观察,及时照相。如果时间过长,脂肪滴会自发破裂。


相关推荐

  • Xeno-Free人间充质干细胞培养基(无酚红)

    MORE
  • Applied Cell™ Xeno-Free人间充质干细胞培养基

    MORE
  • Applied Cell™ Xeno-Free细胞消化液(无动物源,无病毒污染,符合2015版美国药典规定)

    MORE
  • Applied Cell™ 人间充质干细胞诱导成软骨分化试剂盒

    MORE
  • Applied Cell™ 成脂检测染液

    MORE
  • Applied Cell™ 成骨检测染液

    MORE
  • Applied Cell™ 成软骨检测染液

    MORE