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多能干细胞

Applied cell™ 人多能干细胞分化培养基

目录价:1980元

货号:AC-1001002
规格:500mL
保存条件:基础培养基2-8℃,添加剂-20~-80℃;混匀后2-8℃,2周内使用完毕。
使用范围:人多能干细胞诱导分化,拟胚体形成
保质期:12个月

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  • 质检报告
产品简介

     人多能干细胞分化培养基埃泽思生物科技有限公司(Applied Cell™)研发的一款适用于人多能干细胞诱导分化的培养基。该培养基可用于EB(拟胚体)的形成。拟胚体是人多能干细胞在悬浮培养条件下形成的球状结构,可用于细胞多能性检测,形成拟胚体可验证细胞分化潜能。

产品特性

诱导人多能干细胞(ES/iPS)形成拟胚体


产品内容

试剂

规格

数量

运输

hPSC Differentiation Basal Medium

人多能干细胞分化基础培养基

500mL

1 瓶

冰袋

hPSC Differentiation Supplement

人多能干细胞分化添加剂

10mL

1

干冰




操作方法

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ES细胞Applied Cell™: Cat. no.AC-2001002



2. 实验准备

人多能干细胞分化培养基配制:

1.1 2-8℃解冻人多能干细胞分化添加剂轻晃摇匀

1.2 随后将添加加入到人类多能干细胞分化基础培养基中(每10mL添加剂与500mL分化基础培养基彻底混合)混匀即为人多能干细胞分化培养基AC-1001002人多能干细胞分化培养基可在2-8℃稳定储存2-3周。

注意:

1。 人多能干细胞分化添加剂只能在2-8℃解冻,可按实际用量对添加剂进行分装,分装后立即使用或储存于-20℃-80℃保存。

2。 人多能干细胞分化培养基使用前建议在室温平衡10-20min,不建议在37℃加热。

实验操作(以6孔板为例)

2。1 在显微镜下观察人多能干细胞,确认细胞汇合度达到70–80%,准备传代。

2。2 清洗:拿出培养板,吸掉原有培养基,沿培养皿边缘缓慢加入37℃预热PBS缓冲液,轻轻晃动冲洗,然后吸去PBS缓冲液;

2.3 消化:在培养板中加入1.5mL多能干细胞无酶消化液AC-1001008使之覆盖皿

底,并置于37℃,5%CO2培养箱中孵育2~5 min

2.4  吹打:吸掉人多能干细胞消化液AC-1001008后,立刻加入室温平衡好的

多能干细胞分化培养基,用移液枪扇形吹打培养皿底,吹次数保持在

3~5次,使皿底贴附的干细胞集落脱落,轻柔缓慢吹吸混匀,制成干细胞悬液;

注意:吹吸皿底细胞的力度要轻柔,吹打脱落和吹吸混匀的次数在3~5次为宜,尽量避免形成单细胞。如有少量细胞无法从皿底脱落,属于正常现象。如有大量细胞无法从皿底脱落,需延长消化时间。

3.5制备拟胚体

3.5.1悬滴培养法制备拟胚体

A. 稀释:将细胞悬液稀释,细胞密度约为1-2×105cells/mL

B. 制备悬滴将稀释好的细胞悬液以30-50uL/(3000-7000 cells/),均匀接种在培养皿皿盖内面,翻转培养皿盖将其扣回加有PBS的培养皿上加入PBS防止悬滴蒸发放入37℃5%CO2箱中培养

C. 3-4后,非贴壁型培养皿中预先加入人多能干细胞分化培养基将培养皿盖上的悬滴转移至培养皿6cm培养皿加入3-4mL培养基)中,可观察到明显的拟胚体结构,轻轻晃动培养皿使拟胚体均匀分布在培养皿中继续培养。

3.5.2悬浮培养法制备拟胚体  

A. 稀释:将细胞悬液稀释,细胞密度约为2-5×105cells/mL

B。 接种:将稀释好的细胞悬液接种至非贴壁型培养皿内

3。6换液

A。 换液频率:使用悬滴法制备拟胚体,将悬滴接入非贴壁型培养皿继续培养后,2-3天换一次液使用悬浮培养法制备拟胚体大约3天形成明显拟胚体结构,可进行初次换液,后续2-3天换一次液;

B。 换液方法:将需换液的拟胚体悬液转移至15mL/50mL离心管中,静置约3min,待拟胚体沉降至管底,吸掉上清,加入室温平衡好的人多能干细胞分化培养基用巴士滴管轻轻转移至非贴壁型培养皿中,轻轻晃动培养皿使之均匀分布在培养皿中,37℃5%CO2培养箱中继续培。



细胞形态图

     

                                                                                            拟胚体形态图




质量控制

项    

指  标

澄清

PH

7.0-7.4

 mOsM

280-320

EU/mL

0.25

微生物限度

无菌试验合格,0.1um过滤

细胞生长试验

形态

正常

细胞生长试验

合格

pH 偏差范±0.30

压偏差范±5b的渗压偏差范±5


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